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防备細胞培育中污染的铲除
发布时间:2020-08-10   点击次数:162次

一、汙染的防範
    防范是防止細胞培养过程中发生污染的方法。只有防范作业做在前,才华将发生污染的可能性降到小程度。一般防范可从以下几方面着手:

(一)從操作者做起
1、操作者責任心要強,要仔細穩重,操作技術要娴熟。進無菌室前要用肥皂洗手或用5%新潔爾滅浸泡5分鍾,按規定穿阻隔衣。進入後關好門,坐下來盡量少走動。作業開始要先用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和炙烤瓶口。事先要嚴峻查看器材、溶液和培養物,不要把汙染品或未經消毒的物品帶入無菌室內,更不能隨意運用,防止形成大批汙染。

2、操作者動作要輕,必須在火焰周圍無菌區內翻開瓶口,並將瓶口滾動炙烤。操作時盡量不要談話,若打噴嚏或咳嗽應轉向反面。

3、操作時要常替換吸管,切勿一根吸管做到底。一旦發現吸管口觸摸了手和其他汙染物品應棄去。實驗完畢及時拾掇,堅持實驗室清潔規整,zui後用消毒水浸泡的紗布擦台面。

(二)從物品、用品消毒滅菌著手
細胞培养所用物品清洗、消毒要彻底,各种溶液灭菌除菌要仔细,并在无菌实验阴性后才华运用。操作室及剩下的无菌器材要定期清洁消毒灭菌。

(三)防止細胞交叉污染
在进行多种細胞培养操作时,所用用具要严峻区别,做上符号便于区分。并按次第进行操作,防止一同进行时易发生混乱。

在进行换液或传代操作时,注射器和滴管不要触及細胞培养瓶瓶口,防止把細胞带到培养液中污染其他細胞。

一切細胞一旦购置,或从别处引进,或自己建立,均应及早留种冻存,一旦发生污染可弃之复苏,从头培养。

    二、污染的根除
    培养細胞一经污染,大都较难处理。假如污染細胞价值不大,宜弃之;有細胞株留存的或可购置的,可在寻找原因后彻底消毒操作室,复苏或从头购置細胞,再培养。若污染細胞价值较大,又难于从头得到,可采纳以下方法根除。

(一)運用抗生素
    抗生素对杀灭细菌较有用。联合用药比单独用药效果好。防范用药比污染后再用药效果好。防范用药一般用双抗生素(青霉素100u/mL加链霉素100μg/mL),污染后根除用药需采用大于常用量5~10倍的冲洗法,于加药后效果24~48小时,再换惯例培养液。此法在污染早期可能有用。所用抗生素种类除青霉素、链霉素外,还可用庆大霉素、卡那霉素、多粘菌素、四环素、制霉菌素等。常用400~800μg/mL卡那霉素或200μg/mL四环素处理,每隔2~3日换液1次,传1~2代进行治疗。近年来有报道,4-氟,2-羟基喹啉(Ciprofloxacin,Cip)、截耳素衍生物(Pleu-romutilinderivative,BM-Cyclin2:BM-1和四环素衍生物(BM-2)等三种抗生素单用或合用对杀灭支原体有用。这三种抗生素均用PBS配成250X浓缩液,-20℃保存备用,运用浓度Cip为10μg/mL,BM-1为10μg/mL,BM-2为5μg/mL。运用时先吸除污染的培养液,参加含BM-1的RPMI1640培养液,3天后再吸除培养液,参加含BM-2的RPMI1640培养液,培养4天,如此连续3个次第,直至用33258荧光染色镜检证明已根除支原体后,再加正常培养液培养传代3-4次。

(二)運用支原體特異性血清
    用5%的兔支原体免疫血清(血凝效价1:320以上)可去除支原体污染,因特异抗体可抑制支原体生长,故经抗血清处理后11天即转为阴性,并且5个月后仍为阴性。但此法比较费事,不如用抗生素便利、经济。

(三)加溫處理

将污染的组织培养物放在41℃培养18小时,可杀死支原体,但对細胞有不良影响。所以在处理前要进行预实验,摸索能zui大极限杀死支原体又对細胞影响zui小的加热时刻。此法有时不可靠。若先用药物处理后,再以41℃加温处理效果更佳。

(四)其他方法
    除了上述去除污染的方法外,还有动物体内接种除菌法、巨噬細胞吞噬法、污染培养瓶中加溴尿嘧啶再用光照耀的方法及过滤法等,但均较费事,且效果不确定。所以一旦支原体污染,除非有特别重要价值,一般均弃之从头培养。

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